Мазок крови: выполнение и алгоритм исследования

Клинический анализ крови означает подсчет количества клеток в образце венозной крови. Капиллярная кровь не является рекомендуемой средой исследования для подсчета клеток, однако исследование гемограммы часто выполняют из образца капиллярной крови в отделениях интенсивной терапии.

Определение лейкоцитарной формулы, исследование среднего размера эритроцитов, тромбоцитов, определение количества предшественников эритроцитов (ретикулоцитов) и степени их зрелости, оценка скорости оседания эритроцитов и т.д., все это входит в понятие «клинический анализ крови».

Клинический анализ крови выполняется как первое скрининговое исследование при обращении и жалобах пациента на недомогание. Может быть выполнен сокращенный клинический анализ крови, так называемая «тройка» – подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов и определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Сокращенный клинический анализ крови малоинформативен, т.к. может охарактеризовать только выраженные патологические процессы.

Более целесообразно из того же объема образца крови выполнить развернутую гемограмму: подсчет количества эритроцитов с оценкой их среднего размера (MCV), подсчет общего количества лейкоцитов и оценку лейкоцитарной формулы (подсчет нейтрофилов, базофилов, эозинофилов, моноцитов, лимфоцитов), подсчет количества тромбоцитов и оценку среднего размера тромбоцита (MPV), ретикулоцитов и их среднего размера (MRV), степени зрелости ретикулоцитов (IRF).

Многочисленные характеристики клеток в настоящее время могут быть получены в автоматическом режиме в течение 3-5 минут после взятия крови. На основании развернутого исследования гемограммы может быть сделано не только заключение о наличии воспалительной реакции, анемии, но и характере других патологических процессов, возможной перенесенной или продолжающейся кровопотере, дефиците не только железа, но и витамина В12, фолиевой кислоты.

Метод исследования

Метод исследования зависит от требуемых параметров гемограммы.

В ручном режиме, из образца крови (3–5 мл) часть отбирается в капилляр для определения СОЭ, часть образца крови используется для определения гемоглобина, капля крови – для приготовления мазка и дальнейшего подсчета лейкоцитарной формулы. Отдельное количество крови требуется для приготовления мазка и подсчета тромбоцитов, а также часть образца крови необходима для исследования количества эритроцитов и отдельно – ретикулоцитов. В ручном режиме, при необходимости окраски и визуальной оценки мазка, результат развернутой гемограммы пациента в многокоечном стационаре, может быть получен в конце рабочего дня или позднее.

В условиях автоматизированного подсчета клеток и оценки различных популяций требуется от 150 до 300 мкл крови и 100 мкл для определения СОЭ. Исследование в автоматическом режиме основано на импедансном методе Культера (1956), в основе которого лежит принцип замыкания электрической цепи каждой клеткой, последовательно проходящей через апертуру пробоотборника. В последующем метод автоматизированного подсчета получил ряд усовершенствований, в современных анализаторах каждая клетка оценивается по нескольким параметрам: проводимости, светорассеиванию, размеру, наличию на поверхности CD-маркеров, соответственно, принадлежности к различным популяциям. Количество параметров определяется моделью прибора.

Исследование в автоматическом режиме позволяет выявить патологические образцы, которые должны быть пересмотрены визуально специалистом лабораторной диагностики. Визуальный контроль гемограммы предполагает приготовления мазка крови, слайда, что может быть выполнено из капли крови уже взятого образца как в ручном, так и автоматическом режиме. Автоматизированное приготовление мазка крови предпочтительно, т.к. происходит равномерное распределение капли крови и стандартизированное окрашивание. Визуальная микроскопия мазка проводится в пяти полях зрения.

Исследование крови в автоматическом режиме занимает 3–5 минут, если не требуется дополнительное приготовление мазка и исследование СОЭ.

Как выглядит кровь под микроскопом?

При большом увеличении можно увидеть все три типа клеток крови.

Эритроциты – красные тельца дисковидной формы, которые транспортируют кислород по телу человека. Диаметр – 7–10 мкм. Цвет этих клеток обусловлен содержанием в них гемоглобина – специального вещества, которое позволяет им переносить молекулы кислорода. Эти клетки наиболее многочисленны, поэтому, рассматривая кровь человека под микроскопом, их вы увидите в первую очередь.

Лейкоциты – клетки округлой формы размером от 7 до 20 мкм. Именно они и формируют иммунную систему, защищающую организм от болезнетворных вирусов, бактерий и грибков. Существует несколько разновидностей лейкоцитов: лимфоциты, моноциты, базофилы, нейтрофилы и эозинофилы.

Тромбоциты – плоские бесцветные клетки, отвечающие за свертываемость крови. У них наименьшие размеры – от 2 до 4 мкм, – поэтому подробно рассмотреть их можно только с помощью профессионального микроскопа.

Условия взятия и хранения образца

Клинический анализ крови выполняется из венозной крови, стабилизированной калиевой солью ЭДТА, если не указано иначе в инструкции к анализатору. Взятие крови выполняется натощак. Образец крови должен быть немедленно после взятия перемешан 9 раз осторожным переворачиванием, следует избегать образования пены и резкого встряхивания. До исследования образец крови может храниться при комнатной температуре (23–24 °С) в течение 24 часов в штативе, в вертикальном положении, в удаленном от света месте.

При использовании образца капиллярной крови для клинического анализа необходимо получить свободнотекущие капли капиллярной крови из предварительно прогретой области прокола. Сбор капиллярной крови без сдавливания пальца обеспечивает сохранность клеток. Надавливание области прокола и сбор образца из охлажденной конечности приведут к искажению результатов гемограммы. Образцы капиллярной крови должны быть стабилизированы калиевой солью ЭДТА, поэтому для взятия образца следует использовать капилляры, обработанные K3ЭДТА. Образцы могут храниться при комнатной температуре (23–24 °С) в течение 24 ч в штативе, в вертикальном положении, в удаленном от света месте.

Мазок крови: выполнение и алгоритм исследования

Н. Пулетти

Изготовление мазков крови технически простое и быстрое. Для получения максимальной информации оценку клеток крови необходимо систематизировать.

На практике не всегда удаётся при использовании гематологической экспресс-диагностики получить достаточные объективные данные. Исследование мазков крови позволяет относительно быстро уточнить и дополнить полученную информацию. Этот способ позволяет выявить некоторые элементы, которые не проявляются при проведении автоматизированных клинических исследований крови (например, изменение формы эритроцитов, сдвиг лейкоцитарной формулы влево [в сторону незрелых нейтрофилов] или наличие паразитов в крови). В некоторых случаях этот метод позволяет поставить окончательный диагноз.

Подготовка и окраска мазков крови

При заборе материала у идеально спокойного животного со средним диаметром уширения вены кровь должна быстро поступать в пробирку, содержащую антикоагулянт. Чаще всего используется ЭДТА (этилендиаминтетраацетат), потому что этот антикоагулянт позволяет лучше сохранить исследуемые форменные элементы крови. Однако для упреждения разного рода морфологической деградации клеток промежуток времени между взятием свежей и хорошо гомогенизированной крови и изготовлением препарата должен быть максимально коротким (J.W. Harvey, 2001; D. Walker, 2008).

Подготовку мазков начинают со взятия капли крови (обычно одной из капиллярной трубочки) на край предметного стекла. Затем каплю размазывают с помощью второго стекла, которое скользит по первому (фото 1а и 1б). Хорошо подготовленный мазок крови имеет в конце его так называемый «язык кошки». Он указывает на то, что образец выполнен корректно и позволяет провести обследование крови качественно (рисунок). Окраску проводят стандартным методом (Diff-Quick®, RAL®, Wright-Giemsa®). Перед окрашиванием изготовленный мазок высушивают на воздухе покачиванием предметного стекла, что позволяет избежать формирования светлой неокрашенной зоны в центре эритроцитов и, соответственно, исключить ошибочную интерпретацию гипохромии (фото 2) (D. Walker, 2008). Могут иметь место и другие артефакты окраски. Например, окрашивание по Райту даёт преципитат, если краску не обновили через какой-то период времени, если предметное стекло находилось длительное время в окрашивающем растворе или оно было плохо отмыто после окраски (фото 3) (D. Walker, 2008). В результате скопление красителя можно интерпретировать как наличие в крови бактерий или паразитов. Кроме того, окрашивание мазка и морфология клеток могут быть изменены при контакте предметного стекла с парами формалина. Обычно мазки крови красят по методу Романовского (Wright® или Wright-Giemsa®), на основе эозина и метиленового синего.

Классическая окраска отличается от быстрой. В последние время такие методы быстрой окраски, как Diff-Quick®, имеют преимущества, поскольку они устойчивы к вариациям рН растворов и образованию депо окрашивающего вещества. Тем не менее они менее эффективны для выявления полихроматофилов и плохо окрашивают гранулы базофилов и мастоцитов (J.W. Harvey, 2001; D. Walker, 2008). Чтобы получить специфическую визуальную картину ретикулоцитов, необходимо провести окраску с новым метиленовым синим (NBM). В пластиковой пробирке каплю крови перемешивают с двумя каплями NBM. Пробирку оставляют при комнатной температуре на 10 минут. Маленькую каплю после перемешивания помещают на предметное стекло и размазывают так же, как при выполнении мазка крови. Затем предметное стекло быстро высушивают на воздухе и исследуют под микроскопом с большим увеличением (×50–×100).

Систематическое исследование мазков крови

При оценке мазка крови очень важно руководствоваться единой схемой исследования.

Мазок крови, выполненный одним тонким (моноцеллюлярным) слоем с округлостью на конце, утолщается к основанию. Клетки крови оценивают на тонком слое, потому как толстый слой несёт в себе мало информации. При малом увеличении (×10 или ×20) краевую часть мазка, в основном его округлый конец, обычно обследуют на выявление агрегатов тромбоцитов или широких атипичных клеток (лифмобластов или дендритных клеток) (фото 4). Агрегаты тромбоцитов после их активации формируются in vitro. Этот феномен происходит иногда в результате трудного забора крови, что, например, наиболее часто отмечают у кошек (E. Duan Lassen, G. Weiser, 2006; S.L. Stockhman, M.A. Skkott, 2008; D. Walker, 2008).

Тонкий слой может иметь форму зигзагов или косичек, что позволяет очень чётко наблюдать разные клетки крови при направленном исследовании по алгоритму APEL (A — другие [например, атипичные клетки, паразиты крови]; Р — тромбоциты; Е — эритроциты; L — лейкоциты).

Исследование мазков крови — это довольно распространённый метод, позволяющий быстро диагностировать многие часто встречающиеся нарушения у собак и кошек. Основными условиями эффективного использования этого метода диагностики являются строгое соблюдение техники подготовки мазка и систематическое исследование с соблюдением алгоритма исследования.

Основные положения

— После забора материала кровь следует быстро поместить в пробирку с антикоагулянтом для того, чтобы сохранить качество клеток.

— Окраска новым голубым метиленовым позволяет идентифицировать ретикулоциты.

— Оценку осуществляют на тонком слое мазка крови со считыванием под микроскопом на уровне его косичек.

— Под систематическим исследованием мазка крови подразумевается алгоритм APEL.

СВМ № 5/2010

Оценить материал

Нравится Нравится Поздравляю Сочувствую Возмутительно Смешно Задумался Нет слов

2

Анализ состояния плазмы

Жидкая часть крови – плазма

, дает нам достаточно большой объем информации о состоянии внутренней среды организма. Наличие в ней различных включений: кристаллов холестерина, солей мочевой и ортофосфорной кислот, бактерий, личинок, грибов и их спор, быстрое появление нитей фибрина – является указанием на предрасположенность к развитию той или иной болезни. Кристаллы холестерина формируются при нарушении липидного обмена. Несостоятельность процесса пищеварения, функции печени и поджелудочной железы ведет к гиперлипидемии, что со временем приводит к патологическому состоянию – гиперхолестеринемии. Холестерин кристаллизуется, адсорбирует на своей поверхности шлаки, продукты жизнедеятельности бактерий, фиксируется в сосудах и становится основой атеросклеротического поражения. Это может стать причиной развития сердечно-сосудистой патологии.

О чем свидетельствуют соли ортофосфорной кислоты

Соли ортофосфорной кислоты

в крови свидетельствуют о выраженном нарушении фосфорно-кальциевого обмена, дефиците кальция в организме, что опять же является предпосылками к развитию различных заболеваний. Фосфорная кислота образуется при утилизации белков, тяжелой физической нагрузке, употреблении продуктов с загустителями, ароматизаторами и т.п. Фосфорная кислота является «маркером» потерь кальция. Она насыщает себя•ионами кальция, и когда•организм•выводит ее, вместе с ней выбрасывает и накопившийся в ней кальций.

Наличие кристаллов мочевой кислоты в крови

Наличие кристаллов мочевой кислоты

в крови позволяет оценить уровень белкового обмена в организме, работу почек, печени. Мочевая кислота представляет собой побочный продукт усвоения белков. При•прохождении мочевой кислоты через печень, она перерабатывается в мочевину, после чего•почки выводят ее из организма. Нарушение метаболизма белков приводит к избыточному образованию мочевой кислоты, ее солей (уратов), формированию конкрементов в мочевыводящих путях, отложениям в суставных капсулах и суставных поверхностях.

Гемосканирование крови: как проводится

Микроскоп соединён с видеокамерой, которая выводит изображение на монитор, а также даёт возможность делать фото- и видеосъемку интересных объектов. Известно, что кровь выполняет очень важные функции в организме. Прежде всего, кровь – это транспортная система, которая соединяет работу всех органов и систем. Кровь взаимодействует с каждой клеткой организма, доставляя им кислород, биоактивные, питательные вещества, и выводит продукты жизнедеятельности, токсины и шлаки, которые выделяют клетки в процессе функционирования. Кровь транспортирует иммунные клетки в очаги воспаления или внедрения чужеродных агентов (инфекции, аллергенов), доставляет тромбоциты в очаги кровотечения. На состоянии и составе крови отражаются все патологические процессы, возникающие в организме – воспалительные, инфекционные, метаболические, иммунные, аллергические и др. При нарушении пищеварения, функции органов выведения (почки, кишечник, кожа и легкие), при дисбактериозе и паразитозе кровь закисляется, перегружается токсическими веществами, свободными радикалами.

Что может «рассказать» количество тромбоцитов

Тромбоциты

являются клетками свертывающей системы крови. Изменения количества, формы, агрегации тромбоцитов являются признаками нарушении гомеостаза: при кровопотерях, разрегулированности свертывающей системы, обезвоживании, смещении рН в кислую среду, острых инфекциях, анемиях, обменных нарушениях, синдроме внутрисосудистого свертывания. Увеличение количества тромбоцитов, их агрегацию вызывают провоцирующие и способствующие проявлению факторы: гипокинезия, ожирение, чрезмерные физические нагрузки, охлаждение, внутривенные манипуляции, прием гормональных противозачаточных препаратов.